人乳頭瘤病毒16（HPV-16）PCR試劑盒

產(chǎn)品名稱：人乳頭瘤病毒16（HPV-16）PCR試劑盒

英文名稱：Human Papillomavirus 16 (HPV-16) PCR Kit

人乳頭瘤病毒是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒 A 屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為尋常疣、生殖器疣（尖銳濕疣）等癥狀。 隨著性病中尖銳濕疣的發(fā)病率急速上升和宮頸癌、肛men癌等的增多，人乳頭瘤病毒（hpv）感染越來越引起人們的關(guān)注。HPV16 是高危型病毒，有宮頸癌傾向，是癌前病變。因此快速檢測人乳頭瘤病毒 16 具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1.    即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2.    引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人乳頭瘤病毒 16 ，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3.    提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.    PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5.    本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

【試劑組成】

【自備試劑】樣品RNA。

【注意事項】

一、樣品 DNA 的制備

1.    用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸/提取試劑盒兼容。

2.    如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 人乳頭瘤病毒16 PCR 陽性對照而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板DNA放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3.    對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個PCR 管中分別加入下列成分

4.    按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5.    取 5-10 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物就行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測擴(kuò)增效果，由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短，建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

6.    陽性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長度為200bp左右。如果兩個陰性對照有此擴(kuò)增產(chǎn)物，說明環(huán)境污染，則整個實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7.    如果所有樣品和PCR陽性對照均無此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明有系統(tǒng)性的問題（試劑、設(shè)備、程序、操作等），需要重復(fù)并排查原因。

8.    如果沒有上述兩種情況，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2個樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽性，無則判定為陰性。